关于洁净室检测若干问题的认识

山东省生物制品研究所 王惠
山东泰安市中心医院眼科医院 彭亚丽

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前言
1.洁净室的微生物污染
2.微生物检测
3.悬浮粒子的检测
4.认识洁净室维护管理的重要性
5.讨论与建议
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关键词：

洁净室 微生物 悬浮粒子 浮游菌 沉降菌 检测 问题

前言

    随着我国医药行业GMP 制度的逐步实施，微电子、生物制药技术突飞猛进，空气洁净技术被广泛地应用于生物制品、生化制药、医院制剂、食品饮料、基因工程等医药卫生领域，对无尘车间的要求越来越高。目前我国有超过6000家制药厂须按GMP 标准提高洁净车间的等级。因此，普及洁净室的知识，加强洁净度的检测工作，提高对洁净窒维护管理的认识，在当前实际工作中就显得尤为重要。笔者结合在检测工作中的心得，谈谈有关洁净室洁净度检测问题的一些看法。

1.洁净室的微生物污染

1.1 来自人体、空气的污染

    在正常生理作用或某些病理状态下，人体表皮细胞鳞屑总是不断地脱落下来，每分钟大约7000～10000个左右，其中10%带有细菌。由于空气中悬浮着大量的尘粒，为细菌提供了载体和生存条件，所以大气是最主要的细菌来源。

1.2空调系统

    如果处理的不好，也是主要的细菌来源。按照微生物学理论，尘粒和水分可以为细菌提供必要的生存条件。因此，凡是有尘粒和水分的地方就会有细菌繁殖。空调系统有不少的地方既容易积聚尘粒又容易形成水分或高湿度区域。这些地方为霉菌的生长和繁殖创造了条件。借助空气的流动将尘粒和细菌带到被污染的区域，而正是因为空气的流动性大，污染的范围大，污染过程比较复杂，控制起来难度就比较大。是一个是值得注意的重点。

2.微生物检测

    现通常应用浮游菌采样器和沉降菌数(菌落)/m³来表示。

2.1    浮游菌采样器在检测过程中主要控制采样量，因此采样器必须定时进行检定。校验项目包括定时器、转盘、流量计等，以保证最终测试数据的可靠性。在检测过程中，采样器的消毒也至为重要，要先用消毒剂对采样器的表面包括顶盖、采样管、转盘进行严格的消毒；此外采样者的双手及与被检测区域洁净度相应的工作服穿戴应作到非常规范化，才能保证数据的可靠性。

使用方法：采用计数浓度法，通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养皿，在22～25℃ 的适宜条件下让其繁殖至可见的菌落进行计数，以此来判定洁净环境内的活微生物并评定洁净室的洁净度。表1示国内外浮游菌测定标准。

2.2一般工作中，采用沉降菌检测来监控洁净室比较普遍。在测量沉降菌之前，被检测洁净室的温、湿度已经达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速要控制在规定值内，洁净室已经过消毒。

    在静态状况下进行测试，工作区测点位置离地0.8～1.0m，沉降菌的最少采样点数可按表2确定：

表2 最少采样点数目

注：表中的面积，对于单向流洁净室，指送风面积：对非单向流洁净室指房间面积。

    在设定最少采样点数的同时，还要决定最少培养皿数，用计数方法得出各个培养皿的菌落数，再计算平均菌落数，来评定洁净室是否合格。取10000级洁净室沉降菌实际测定结果为例：

表3 10000级洁净室沉降菌的测定

    根据我国GMP的标准，菌落数在10万级应≤10/m³；万级应≤ 3/m³；百级≤ 1/m³。此结果符合国内有关沉降菌测定的标准。

2.3测量菌落是一项很耗时的工作，并且不能实时进行。只有把沉降板放在被检测区域才行。检测结果受到多种条件的控制

①气流：细菌以尘粒为载体会按空气的方向和速度运动，因此控制气流的形式具有重要的意义。永远适用的原则是：气流要从最洁净的房间流向次洁净的房间；

②沉降板的摆放及时间：需要根据各种因素制定相应的规范，以确保能真实地反映洁净室的洁净度；

③ 随着新的国际标准IS0的逐步实施，洁净室微生物检测标准也会更加严格。

    由于空气中的尘粒(微粒)可以瞬间就测量出来，人们试图找到空气中的微粒与细菌数目之间的数量关系。但是，在微粒与细菌菌落的数目之间没有一对一的关系。现已证明。直径≥3～5μm的微粒对病毒和细菌的传输有责任。不过在洁净室中可能有很多的微粒是由于洁净服或无菌的敷料而产生的。这些微粒自然与细菌的污染没有关系。

3.悬浮粒子的检测

3.1目前，检测尘粒使用各种型号的尘粒计数器，其性能指标基本上能符合检测要求，但普遍存在一定的问题：

①精确度不够。所测量的悬浮粒子数以粒研计，而实际检测标准却是粒/m³，需将检测结果进行换算，造成一定的误差，体现不出真实的数据；

②仪器光电管容易老化，噪声大；

③仪器的检定工作太局限(全国只有几个计量部门检定)，给使用单位的检测工作带来不便。

3.2在对洁净室进行检测前，除按规定标准进行消毒外，还要开启净化设备约30min左右，待洁净室内空气气流稳定后方可进行检测。在检测的过程中，发现不同程度的存在一些问题：

①没有必要长时间开启净化器。若洁净室需要很长的时间才能自净，就说明设计存在问题。一般说来，10万级房间提前开启净化器的时间不超过40min，万级房间不超过30min，尘粒数就应该达到当前GMP规定的洁净度标准；

②被检测区域湿度超标，原因可能是工作人员认为地面湿度大(湿度大于65%RH时)会减少尘粒数，但实际上这样会导致霉菌的生长；

③ 如果在设计级别洁净室时，设计标准比规定要求高一个级别，如要求100万级，按30万级设计；要求30万级，按10万级设计。笔者认为这样能够保证所设计的洁净室在一定的时间内，很快达到规定要求的级别标准。

4.认识洁净室维护管理的重要性

    对洁净室进行正确的、常规的运行维护与管理，是保证洁净室能正常运转的重要工作。在检测过程中，曾发现有的工作人员在洁净室的维护和管理的认识上存有问题。要认识到：保证洁净室的正常运转。其运行管理是与设计及施工并重的，设计、施工和维护在洁净室的质量保证中是三足鼎立的。尤其要注意到：

① 指定专人负责洁净室主要参数的日常监督检测，并建立相应的检测记录制度；

② 定期对洁净室的工作人员进行培训，掌握GMP中有关洁净室、净化系统的养护、使用和维护的知识；

③ 注意化学消毒剂的定期更换；洁净室内不同洁净度区域要有各自专用的消毒用品，防止交叉。

5.讨论与建议

    在确定洁净室的级别时，根据确定阈值或测定方法的不同，会遇到各种规定中相互矛盾的要求，这可能是对洁净室的要求和对工艺有关的要求之间的差异。而GMP标准则完全侧重于制药行业中特定的要求，同时还规定了对洁净室的要求。目前由于GMP标准并没有提供完整的细则，所以显得有些太笼统而不能反映技术要求的全貌。

    就目前的实际情况看GMP标准中关于洁净室的规定还远远不够，因此有必要要求药品生产企业、医院制剂单位对洁净室(区)，在现有的状态下做好自控工作，从基本环节的验证做起。充分认识到洁净度与药品质量的重要关系。对有洁净度要求的环境，严格执行现有的该行业的洁净标准要求，按规定进行自检，加强有关人员的专业知识培训，强化对洁净知识的认识，保证人民用药的安全有效。

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